上海軒澤康生物ELISA試劑盒種類繁多，根據(jù)產(chǎn)品名稱原理大致分為間接法、夾心法、競爭法、捕獲包被法（也稱為反向間接法，比較少見）。其中各類型試劑盒的基本原理可電詢我司業(yè)務(wù)人員進行詳細(xì)了解。以下是關(guān)于各類型ELISA試劑盒及適用類型：

①間接法：測定總抗體或IgG抗體

②抗體夾心法：測定二價或二價以上大分子抗原

③抗原夾心法：測定抗體

④抗體競爭法：測定抗體

⑤抗原競爭法：測定只有一個抗原決定簇的小分子半抗原

⑥捕獲包被法：測定IgM,傳染病的早期診斷

檢測原理：試劑盒采用雙抗體一步夾心法酶聯(lián)免疫吸附試驗（ELISA）。往預(yù)先包被血紅蛋白（Hb）抗體的包被微孔中，依次加入標(biāo)本、標(biāo)準(zhǔn)品、HRP標(biāo)記的檢測抗體，經(jīng)過溫育并洗滌。用底物TMB顯色，TMB在過氧化物酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍色，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成最終的黃色。顏色的深淺和樣品中的血紅蛋白（Hb）呈正相關(guān)。用酶標(biāo)儀在450nm 波長下測定吸光度（OD 值），計算樣品濃度。

試劑的準(zhǔn)備：20×洗滌緩沖液的稀釋：蒸餾水按1：20稀釋，即1份的20×洗滌緩沖液加19份的蒸餾水。

洗板方法：

1.  手工洗板：甩盡孔內(nèi)液體，每孔加滿洗滌液，靜置1min后甩盡孔內(nèi)液體，在吸水紙上拍干，如此洗板5次。

2.  自動洗板機：每孔注入洗液350μL，浸泡1min，洗板5次。

科研雞血紅蛋白(Hb)測定試劑盒ELISA操作步驟：

1.  從室溫平衡20min后的鋁箔袋中取出所需板條，剩余板條用自封袋密封放回4℃。

2.  設(shè)置標(biāo)準(zhǔn)品孔和樣本孔，標(biāo)準(zhǔn)品孔各加不同濃度的標(biāo)準(zhǔn)品50μL；

3.  樣本孔先加待測樣本10μL，再加稀釋液40μL；空白孔不加。

4.  除空白孔外，標(biāo)準(zhǔn)品孔和樣本孔中每孔加入辣根過氧化物酶（HRP）標(biāo)記的檢測抗體100μL，用封板膜封住反應(yīng)孔，37℃水浴鍋或恒溫箱溫育60min。

5.  棄去液體，吸水紙上拍干，每孔加滿洗滌液，靜置1min，甩去洗滌液，吸水紙上拍干，如此重復(fù)洗板5次（也可用洗板機洗板）。

6.  每孔加入底物A、B各50μL，37℃避光孵育15min。

7.  每孔加入終止液50μL，15min內(nèi)，在450nm波長處測定各孔的OD值。

科研雞血紅蛋白(Hb)測定試劑盒ELISA實驗中問題解答：

【檢測的結(jié)果沒有吸光度值或吸光度值很低】

可能造成的原因：1.使用的試劑盒已過有效期 2. 沒有充分回溫、孵育的溫度太低

上海軒澤康生物為您解答：建議更換有效期以內(nèi)的試劑盒，使用同一批次試劑盒內(nèi)的內(nèi)容物并嚴(yán)格按照說明書步驟進行操作。在實驗操作的整個過程中仔細(xì)觀察恒溫箱的溫度。

【吸光度值偏高】

可能造成的原因：孵育溫度過高，反應(yīng)時間過長。

上海軒澤康生物為您解答：建議調(diào)整孵育環(huán)境的溫度，如無法調(diào)整室內(nèi)溫度請將顯色時間適當(dāng)縮短，控制反應(yīng)時間。

【陰性樣本的吸光度值低】

可能造成的原因：酶標(biāo)板孔中的試劑未充分的混和

上海軒澤康生物為您解答：注意操作的方法，注意洗滌時的方法。

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